Ｓ−ニトロソグルタチオンの安定化方法、及び該方法により調製される組成物

专利摘要:
本発明は、通常の添加剤と共に、場合により１種又は複数の多糖類型ポリマー（単数又は複数）と共に、Ｓ−ニトロソグルタチオン（ＧＳＮＯ）を有効成分として含む、アルカリｐＨを有する医薬組成物に関する。本発明の別の主題は、ＧＳＮＯを含有する溶液又は非固形組成物を安定化させる方法であって、該溶液又は組成物のｐＨがアルカリ値に調整される方法である。
公开号:JP2011509993A
申请号:JP2010542695
申请日:2009-01-16
公开日:2011-03-31
发明作者:ホルニァーク、イシュトヴァーン；ラツェーザ、ジョンボル
申请人:ファルマジェニクス アクチェンゲゼルシャフト；
IPC主号:A61K38-00

专利说明:

[0001] 本発明は、主に、通常の添加剤と共に、場合により１種又は複数の多糖類型ポリマー（単数又は複数）と共に、Ｓ−ニトロソグルタチオン（ＧＳＮＯ）を有効成分として含む、アルカリｐＨを有する医薬組成物に関する。本発明は、酸性条件下で良好な収率で生成したＧＳＮＯが、アルカリ条件下、特に安定化ポリマーの存在下でより安定しているという予想外の発見に基づいている。]
背景技術

[0002] 血栓症の罹患率を増大させる微小循環障害、及び特定の代謝の問題で放出されたフリーラジカルの蓄積の間に発生する血管収縮は、創傷治癒能力の低下、及びいくつかの例では慢性潰瘍につながる複合組織損傷を引き起こす［Ｇｒｅｅｎｍａｎら、２００５、Ｌａｎｃｅｔ、３６６、１７１１〜７；Ｓｉｇａｕｄｏ−Ｒｏｕｓｓｅｌら、２００４、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、５３、１５６４〜９；Ｖｅｖｅｓら、１９９８、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４７、４５７〜６３；Ｈｉｌｅ及びＶｅｖｅｓ、２００３、Ｃｕｒｒ．Ｄｉａｂ．Ｒｅｐ．、３、４４６〜５１；Ｎｉｋｏｌｏｖｓｋａら、２００５、Ａｃｔａ Ｄｅｒｍａｔｏｖｅｎｅｒｏｌ Ｃｒｏａｔ、１３、２４２〜６］。例えば、糖尿病又は血管収縮で発生している微小循環障害を治療するために、多数の皮膚科用薬剤が入手可能である。特徴として、これらの組成物は、精油（例えばローズマリー）、及び臨床的に証明されていない有効性を有する他の非特異性有効成分を含有する。試験結果によると、一酸化窒素（ＮＯ）は、微小循環障害に有益に影響を及ぼすことができる［Ｃａｌｓ−Ｇｒｉｅｒｓｏｎ及びＯｒｍｅｒｏｄ、２００４、Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ、１０、１７９〜９３］。ＮＯは、とりわけ平滑筋弛緩作用を有する、急速に反応するガス状化合物であり、理学療法で吸入剤として使用されている。そのコンシステンシーが原因で、ＮＯは、皮膚科目的で使用することはできないが、臨床観察により、非治癒性潰瘍の治療に対するその有効性が確認されている［Ｍｉｌｌｅｒら、２００４、Ｊ．Ｃｕｔａｎ．Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．、８、２３３〜８］。或いは、ニトロプルシドナトリウムなどのＮＯ供与体化合物を使用することにより、治療有効量のＮＯを表皮に移すことができる。しかし、これらの化合物の投与は、それらの適用を困難にするいくつかの新たな問題を伴う。すなわち、ＮＯ供与体の大部分は、ＮＯだけではなく、長期の適用の間に組織にとって有害である恐れがある他の反応性窒素種も放出する。ＮＯ供与体の分解が非常に早いという事実から、より重要な問題が生じ、したがって、好適な安定性及び予測可能な局所血管拡張作用を有する、血流を増大させる組成物は最適ではない。第３に、皮膚を通して吸収することにより、ニトログリセリンなどのゆっくりと分解するＮＯ供与体組成物は体循環に達し、治療部位から遠い組織でそれらの作用を発揮し、それは好ましくない。硝酸塩含有皮膚パッチは医学の分野で広く使用されており、それらの作用は、それらのＮＯ供与体特性に部分的に基づいている。しかし、血管拡張薬（ＮＯ）の前駆体と見なされる硝酸塩は、直接露出された皮膚表面の血液循環を増大させることなく、体循環に移される。微小循環障害を治療するためのＮＯ供与体の所望の作用は、全く逆である。ＮＯ供与体は、有意な全身作用を発揮することなく、局所血管拡張を生じるべきである。]
[0003] 特定の科学的研究は、微小循環障害の治療でＮＯ合成酵素の基質、すなわち、Ｌ−アルギニンを使用することを既に対象としてきた［Ｆｏｓｓｅｌ、２００４、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ、２７、２８４〜５］。ＮＯ合成酵素系自体は、Ｌ−アルギニンがその活性を発揮するのに必要であるが、この酵素系の損傷は、微小循環障害に特徴的である。さらに、Ｌ−アルギニンは、アルギニナーゼ、アルギニンデカルボキシラーゼなどの様々な他のＮＯ合成酵素競合酵素基質でもある。したがって、上記のものに基づいて、その前駆体の適用より、ＮＯを局所循環系に投与することが好ましいことは明らかである。]
[0004] 一酸化窒素を所望の速度で放出する局所組成物でＮＯ供与体化合物が使用される多数の特許が知られている。例えば、ＵＳ６２８７６０１Ｂ１特許は、ニトログリセリン、ヒドロキシルアミン、ニトロプルシド、硝酸塩又はアジ化物が、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）と組み合わせてＮＯ供与体化合物として使用される製剤を開示している。ＵＳ５５１９０２０特許は、水不溶性窒素酸化物／ポリマー付加物の使用を開示しており、そのポリマーは、例えば、ポリエチレンイミンセルロースでもよい。ＵＳ７０４８９５１Ｂ１ Ｂ２特許は、粉末亜硝酸ナトリウム、アスコルビン酸、及び好ましくはマレイン酸が混合され、得られた混合物が水に曝されると一酸化窒素を放出することを開示している。]
[0005] ポリマーベースのマトリックスが物理的又は化学的に結合した一酸化窒素を含むいくつかの実施形態が知られている。ＵＳ５９９４４４４特許は、生物分解性ポリマー（好ましくはポリ−Ｌ−乳酸）が窒素酸化物供与体化合物、好ましくは無機亜硝酸化合物で含浸されていることを開示している。ＵＳ５７７０６４５２特許は、−ＮＯｘ基で誘導体化され、次いで、ＮＯを放出することができるポリマーを開示している。]
[0006] ＮＯｌａｂｓ（Ｈｅｌｓｉｎｂｏｒｇ、スウェーデン）は、一酸化窒素が糖尿病性潰瘍及び神経障害を含めた様々な疾患の治療に使用されているいくつかの出願（ＷＯ２００６／０８４９１１〜１４）を提出している。これらの疾患では、ＮＯ放出ポリマーは、所望のＮＯ放出を得るのに使用される。線状ポリエチレンイミンのＮＯ誘導体（Ｌ−ＰＥＩ−ＮＯ）を使用することが好ましい。一般的開示では、キトサンは、ＮＯで誘導体化することができる特定のポリマーのタイプとして言及されている。さらに、多糖類は、ＮＯ放出ポリマーの不活性支持体としてのみ言及されている（例えばＷＯ２００６／０８４９１２、ｐｐ．１１〜１２）。]
[0007] 調査研究は、天然のＮＯ供与体である内因性ニトロソチオール化合物、ＧＳＮＯが、局所血管拡張組成物の調製に特に適していることを証明している［Ｓｏｇｏら、２０００、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１３１、１２３６〜４４］。ＧＳＮＯの分解の間に、知られている抗酸化作用を有するＮＯ及び還元型グルタチオンが生成する。その血管拡張及び血小板凝集阻害作用が原因で、局所循環に侵入したＮＯは、皮膚の血液循環を改善し、血栓症形成を阻害する［Ｋｈａｎら、２００５、Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．、２５、１７７〜９２；Ｋｕｏら、２００４、Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．、１１９、９２〜９；Ｓｏｇｏら、２０００、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２７９、４１２〜９］。しかし、水溶液ではこの化合物の半減期が非常に短く、たった５．５時間であるため、その適用性は限定的である。]
[0008] ＧＳＮＯの安定性は、薬学的に知られているビヒクルを使用することにより有意に改善することができる。ポリ（エチレングリコール）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、又はポリ（ビニル−アルコール）は全て、主に、水素結合を形成することによりＧＳＮＯの分解速度を低下させるのに適している［Ａ．Ｂ．Ｓｅａｂｒａら、Ｍａｙ ２００５、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、９５、Ｎｏ．５、９９４〜１００３；Ａ．Ｂ．Ｓｅａｂｒａ、Ｍ．Ｇ ｄｅ Ｏｌｉｖｅｉｒａ、２００４、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、２５、３７７３〜８２；Ｓｅａｂｒａら、２００４、Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ、１１、２６３〜７２］。しかし、これらのアプローチは、周囲温度又は４℃でのその薬剤の半減期をたった数日しか延ばすことができないため、日々の診療に適した安定した組成物を生成するのに十分ではない。]
[0009] 水素結合を安定化させることの役割は、ＵＳ７０１５３４７Ｂ２特許でも強調されており、そこではＳ−ＮＯ基を安定化させることができる分子内ＯＨ又はＳＨ基を有する化合物が特許請求されている。]
[0010] さらに、ポリエチレングリコール骨格と共有結合したＳ−ＮＯ基を含有するＮＯ供与体高分子も知られている［Ｓｅａｂｒａら、２００５ Ｓｐｔ〜Ｏｃｔ、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、６（５）、２５１２〜２０］。]
[0011] 本発明者らの研究に基づいて、特定の多糖類（好ましくはキトサン及び同様の天然のポリマー）はＧＳＮＯを安定化させることができると言えるだろう。それらは、その高分子のヒドロキシル基の相互作用を介してそのようにすることができると考えられる。]
[0012] ヒドロゲルを含むＧＳＮＯが健康な志願者に投与され、局所血流におけるＮＯ依存型の増加が研究の中で観察されたことを開示している刊行物は１つしかない［Ｓｅａｂｒａら、２００４、Ｂｒｉｓｔｉｓｈ Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ、１５１、９７７〜８３］。血管拡張の速度は、ＧＳＮＯの適用濃度、及び皮膚で測定された代謝ＮＯ生成物の両方と十分に相関しており、したがってその作用の特異性を証明する。該研究の間に被検者から副作用は報告されなかった。該研究では、ポリ（エチレンオキシド）／ポリ（プロピレンオキシド）ベースのＳｙｎｐｅｒｏｎｉｃ Ｆ１２７ヒドロゲル（Ｕｎｉｑｕｅｍａ、ベルギー）がビヒクルとして使用された。しかし、該研究で使用されたヒドロゲル組成物は、ＧＳＮＯの分解を減速しないため臨床適用には適しておらず、それ故、各投与毎に新たに調製すべきである。]
[0013] 局所血管拡張のために開発されたニトロソグルタチオン誘導体も知られている［Ｌａｃｅｒ ＳＡ、ハンガリー特許出願第Ｐ０１０５２０３号参照］。これらの環状化合物は、今まで診療で適用されてきていないが、それは、それらの有効性又は代謝に関する情報がないためである。概して、ＧＳＮＯなどのよく知られている代謝を有する内因性作用剤は、合成誘導体と比較しておそらく副作用が少なく、したがっていっそう好ましい。]
発明が解決しようとする課題

[0014] 本発明の目的は、ＧＳＮＯの安定性の強化、したがって、薬局並びに家庭内での貯蔵条件下で十分に安定な、皮膚科適用に適した血管拡張組成物の開発である。本発明の組成物は、そのＧＳＮＯ含量により、臨床的に有意な血流の増大を引き起こすことができ、したがって、好ましくは、潰瘍、糖尿病性末梢神経障害などの神経障害、及び糖尿病性足症候群の治療及び予防に使用することができる。]
課題を解決するための手段

[0015] 本発明者らは、上述の問題の解決策を求めて広範な研究を実施し、アルカリ条件下でＧＳＮＯの代謝速度を有意に低下できることを発見した。ＧＳＮＯは最大収率を得るために酸性条件下で生成されるため、この試験結果は、また、予想外であった（以下のＧＳＮＯの記述及び図１参照）。] 図１
[0016] 予想外なことに、ＧＳＮＯの安定性が、約７．５〜１０のｐＨ範囲内でプラトー様の最大値を有し、約８〜９のｐＨ範囲が好ましく、その場合、その分子が、より安定な構造を有することを発見した。さらに、本発明者らは、ＧＳＮＯがこの範囲内で緩衝能を示すことも発見した（図２参照）。] 図２
[0017] 本発明の好ましい実施形態では、例えば通常適用されるｐＨ４．２６と比較して、約８．６のｐＨ値で非常に良好な安定性が観察される（図３参照）。約４．２６のｐＨ値でＧＳＮＯは緩衝液の様にも振る舞い、したがって、今までＧＳＮＯは、通常の酸性調製に続いて、ほぼ上記のｐＨを有する溶液中に貯蔵されてきたことに留意されたい。] 図３
[0018] 興味深いことに、ＧＳＮＯ代謝は、条件がよりアルカリになると加速する（ｐＨ１２の曲線参照）。]
[0019] 上記試験結果に基づいて、本発明は、貯蔵の間に適切に安定なままであるアルカリＧＳＮＯを含む組成物（好ましくは７〜約１０のｐＨ値を有する）を主に提供し、該組成物は、皮膚上に置かれた後（或いは、適用直前の中和後）有意な局所血管拡張及び血流増大作用を発揮し、したがって上述の疾患の予防及び治療で使用することができる。]
[0020] 本発明者らは、１種又は複数の好適なポリマー（単数又は複数）も該組成物で使用されると特に安定な組成物を得られることも発見した。該組成物のｐＨ値がアルカリ範囲内であるとき、ＧＳＮＯを安定化させることができるポリマー（例えばＰＶＡ、ＰＥＧ）の安定化作用を有意に強化できることを見出した。キトサン（天然の酸性ポリマーである）の適用では、該組成物は、好ましくは約７のｐＨ値まで（すなわち、ほとんど天然、又は弱アルカリ性の値まで）アルカリ化することが好ましい。]
[0021] したがって、本発明は、以下の主題に関する。
１．通常の添加剤と共に、場合により１種又は複数の薬学的に許容できるポリマー（単数又は複数）と共に、ＧＳＮＯを有効成分として含む医薬組成物であって、ｐＨ値が７より高く、好ましくは約７．５〜１０、より好ましくは約８〜９であることを特徴とする上記医薬組成物。
２．以下の群：多糖類、ＰＶＡ、ＰＶＰ、ＰＥＧ、アルギン酸並びにその塩及びエステルから選択される、他の１種又は複数の薬学的に許容できるポリマーを含有することを特徴とする、項目１に記載の医薬組成物。
３．水性ゲルであり、場合により多糖類と共に、好ましくはキトサンと共に、薬学的に許容できるポリマーとしてＰＶＡ及びＰＥＧポリマーを含有することを特徴とする、項目２に記載の医薬組成物。
４．項目１から３までのいずれか一項に記載の組成物を乾燥、好ましくは凍結乾燥させることにより調製されることを特徴とする固形形態の医薬組成物。
５．ＧＳＮＯを含有する溶液又は非固形組成物を安定化させる方法であって、該溶液又は組成物のｐＨが７より高い、好ましくは約７．５〜１０、より好ましくは約８〜９の値に調整されることを特徴とする上記方法。
６．該溶液が水性であることを特徴とする項目５の方法。
７．該組成物が、１種又は複数の薬学的に許容できるポリマー（単数又は複数）及び添加剤（単数又は複数）を含有する非固形医薬組成物であることを特徴とする項目５の方法。
８．該組成物が、多糖類、ＰＶＡ、ＰＶＰ、ＰＥＧ、アルギン酸並びにその塩及びエステルから選択される、他の１種又は複数の薬学的に許容できるポリマーを含有することを特徴とする項目７の方法。
９．該組成物が水性ゲルであり、場合により多糖類と共に、好ましくはキトサンと共に、薬学的に許容できるポリマーとしてＰＶＡ及びＰＥＧポリマーを含有することを特徴とする項目８の方法。]
実施例

[0022] 定義
ＧＳＮＯ
ＧＳＮＯ（Ｓ−ニトロソグルタチオン）は、ＮＯの代謝で重要な役割を有する内因性化合物である。細胞、及びミトコンドリアなどの特定の細胞成分に見られるフリーラジカル捕捉トリペプチドとしての還元型グルタチオンは、分子中の中心のチロシンの側鎖の硫黄原子と結合するＮＯと反応することができ、ニトロソグルタチオンが形成される。ＧＳＮＯの代謝の間にこの結合が分離し、ＮＯが放出され、したがって、ＧＳＮＯはフリーラジカル捕捉分子であるだけではなく、ＮＯ輸送分子でもある。有意な量のＧＳＮＯは、細胞中に存在することができるだけではなく、細胞外空間、例えば血液中にも存在し、したがって、その生理学的機能は、ＮＯ輸送、及び一定のＮＯ血中濃度の維持における寄与である。]
[0023] ＧＳＮＯを合成するためのいくつかの反応スキームが知られている。知られている反応によると、冷たい酸性グルタチオン水溶液に亜硝酸ナトリウムを、その後にアセトンを、撹拌の間に多数のアリコートで添加することが好ましい。得られた沈殿物の分離及び洗浄の後、適切に純粋なＳ−ニトロソグルタチオンが得られる［Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、Ｖｏｌ．２６、Ｎｏ．１６、２０１３〜２０１６、１９８５］。他の調製方法は、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．１９９９、３２、８６９〜８７６；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．Ｉ．、１９９４で開示されており、そこでは、酸性環境で該反応を実施する可能性も開示されている。]
[0024] ＧＳＮＯは、特徴的な吸収スペクトルを有する茶色の化合物である。その２つの特徴的なピークの一方はＵＶ領域にあるが、他方の最大値は約５４０ｎｍである。ＧＳＮＯの吸収スペクトルは、分解の間に変化する。５４０ｎｍでのピークの高さの変化は、ＧＳＮＯの濃度と直線的に比例している。遠赤外線領域での波長は、ＧＳＮＯの分解プロセスの間にそれらに全く変化が生じないため、バックグラウンド吸収として使用することができる。これらの特性により、ＧＳＮＯの濃度を分光測定でモニタリングすることが可能になる。]
[0025] 薬学的に許容できるポリマー
該組成物は、ポリ（ビニルアルコール）［ＰＶＡ］、ポリエチレングリコール［ＰＥＧ］、ポリ（ビニルピロリドン）［ＰＶＰ］、アクリル酸ベースのポリマー（例えば「カルボマー」として商品化されているポリアクリル酸ポリマー）、セルロース、アルギン酸並びにその塩及びエステル（例えば、アルギネートベースのポリマー）などの、１種又は複数の薬学的に許容できるポリマー様の化合物（単数又は複数）を含有し得る。]
[0026] 「多糖類」という用語は、モノマーがグリコシド結合を介して互いに結合している高分子炭水化物（グリカン）を意味する。多糖類は、デンプン、グリコーゲン及びセルロース（デキストラン及びグルコースの重縮合生成物と見なされる）、イヌリン（フルクトースの重縮合生成物）、キチン、アルギン酸などの重要なバイオポリマーを含む。上述の多糖類は特定の糖の重縮合生成物であるため、ホモポリマーと見なし得る。特に、様々なモノマーを含む多糖類（ヘミセルロース、ヘパリン、ヒアルロン酸、ムレインなどのヘテログリカン）も本発明の実施形態で使用することができる。いくつかの知られている誘導体化（例えば脱アシル化、スルホン化等）多糖類も本発明の実施形態で使用することができる。本発明で使用する多糖類は、アルカリ条件下で安定であることが好ましい（アルギン酸、その塩及びエステルなど）。しかし、キトサン［キチン（β−１，４−ポリ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン）の脱アシル化誘導体と見なすことができるβ−１，４−ポリ−Ｄ−グルコサミン］などの、弱酸性ｐＨ条件化で最高の安定性を有するが、中性又はアルカリ条件でも十分な安定性を有する多糖類なども使用することができる。]
[0027] 薬学的に許容できる添加剤
さらに、該組成物は、該組成物の物理的特性の最適化に必要な任意のそのような通常の添加剤を含有し得る。したがって、該組成物は、不活性ビヒクル、ゲル化剤、粘度増加剤、着色剤、緩衝剤、臭気剤、保存剤、安定剤等を含有し得る。]
[0028] 本発明による組成物は、ヒドロゲル、又は水と接触させることにより薬物療法で使用するためのヒドロゲルに変換することができるそのような乾燥組成物であることが好ましい。]
[0029] ヒドロゲル型組成物は、蒸留水又は水溶液を含有することが好ましい。]
[0030] 該組成物の調製方法
本発明の組成物は、それ自体が知られている方法により調製する。水性ゲルは、１種又は複数の好適なポリマー（単数又は複数）（好ましくは、ＰＡＧ、ＰＶＡ、アルギネート、多糖類）から調製し、次いで、所望の濃度のＧＳＮＯをその中に混合することが好ましい。]
[0031] 場合により、得られたアルカリゲルを凍結乾燥する。長期間の貯蔵のため、凍結乾燥組成物を冷蔵庫中に保持することが可能である。実行できるよう、凍結乾燥組成物を水、好ましくは蒸留水で、好ましくはアルカリ条件下で、適用の直前に再生する。]
[0032] ｐＨの調整
該組成物のｐＨの調整は、
ａ）成分の混合後にｐＨ値を調整すること、
ｂ）初期ＧＳＮＯ溶液のｐＨ値を所望のレベルに調整し、次いで、さらなる成分の添加後にそのｐＨ値を確認し、必要であれば、アルカリ又は酸の添加により所望の値に調整すること
により実施することができる。]
[0033] アルカリ化又は酸性化は、薬学的に認められているアルカリ（アルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物、例えば水酸化ナトリウムなど）又は薬学的に認められている酸（水素ハロゲン化物、例えば塩化水素、一般的有機酸、例えば乳酸など）を使用することにより実施することができる。ｐＨ値は通常通り（ｐＨ計測電極、滴定等を使用して）測定した。]
図面の簡単な説明

[0034] 様々なｐＨ値でのＧＳＮＯ生成を示す図である。測定した吸光度値は得られたＧＳＮＯ濃度と比例する。Ｘ軸上にはｐＨ値、Ｙ軸上には吸光度値を示す。
ＧＳＮＯのアルカリ滴定（ＮａＯＨで実施）の曲線を示す図である。緩衝能がｐＨ８〜１０で発揮されていることが分かる。
様々なｐＨ値で得られたＧＳＮＯ代謝の結果を示す図である。Ｘ軸上には時間（日数で示す）、Ｙ軸上には吸光度値を示す。記号は以下のｐＨ値を示す： ＊：ｐＨ＝０．３、 ◆：ｐＨ＝４．２６、 □：ｐＨ＝７．４、 ●：ｐＨ＝８．６、 ○：ｐＨ＝１２．６。
例３に従って実施した測定の結果を示す図である。Ｘ軸上には溶液の番号、Ｙ軸上には相対吸光度値を示す（出発溶液の吸光度を１００と見なす）。各溶液の分解は３６日にのみ観察した。]
[0035] 実施例で使用する物質の一覧は以下の通りである。
１．キトサン、工業純度（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）
２．キトサン、低分子量（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）
３．キトサン、中分子量（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）
４．Ｌ−グルタチオン（還元型、純度９９％、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）
５．亜硝酸ナトリウム（純度９９％、Ｓｉｇｍａ、Ａｌｄｒｉｃｈ）
６．ポリエチレングリコール（平均分子量：２００；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）
７．ポリ（ビニルアルコール）、８０％加水分解、平均分子量：９０００〜１００００（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）
８．乳酸（Ｆｌｕｋａ）
９．分析的に純粋な脱イオン水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）]
[0036] ＧＮＳＯの測定
ＧＳＮＯの吸収スペクトルは変化し、５４０ｎｍでのピークのサイズ変化はＧＳＮＯの濃度と直線的に比例しているため、ＧＳＮＯの分解を分光測定でモニタリングした。遠赤外線領域での波長は、ＧＳＮＯの分解の間にそれらに変化が生じないため、バックグラウンド吸収として使用した。]
[0037] （例１）
ＧＳＮＯの調製
方法Ａ
１．５３ｇの（５ｍｍｏｌ）のＬ−グルタチオン（ＧＳＨ）を、氷浴で冷却した５．５ｍｌの水及び２．５ｍｌ（２Ｎ）のＨＣｌ水溶液の混合物中に溶解させ、次いで、０．３４５ｇの（ｍｍｏｌ）の亜硝酸ナトリウムを添加した。その混合物を５℃で４０分撹拌し、次いで、１０ｍｌのアセトンを添加し、その溶液をさらに１０分撹拌した。沈殿した茶色の堆積物を濾過し、その後、氷冷の水（５×１ｍｌ）、アセトン（３×１０ｍｌ）及びエーテル（３×１０ｍｌ）で洗浄した。こうして１．２９ｇ（３．８ｍｍｏｌ）のＳ−ニトロソグルタチオンを得た（収率７６％）。]
[0038] 方法Ｂ
最初に、０．２０４ｇ（０．６６６ｍｍｏｌ）のＧＳＨ、次いで、等モル量のＮａＮＯ２を８ｍｌの脱イオン水に添加し、その混合物を氷上に保持し、暗所でさらに１０分撹拌した。得られた新しい溶液の計算濃度は２．７２６ｗ％である。]
[0039] その後の試験では、上記方法Ｂに従って新たに調製したＧＳＮＯ溶液を使用した。]
[0040] （例２）
研究した溶液の一般的調製方法
予め調製したＰＶＡ及びキトサンゲルを、最初のＧＳＮＯ溶液を３倍に希釈する量で例１ＢのＧＳＮＯ溶液に混合した。２００μｌのアリコートを２つの９６穴プレートの穴にピペットで加えた。該プレートを覆い、４℃で暗所に貯蔵した。貯蔵の間に調製物は様々な量の水を失ったため、試験の完了後、それらを水で最初の体積に戻す必要が生じた。試験の最初及び最後に分光測定で測定した光学密度の低下％としてＧＳＮＯ濃度を表現した。]
[0041] （例３）
３６日安定性データ
以下のゲルを使用することにより、例２に記載の方法と同様に試験を実施した。３６日後に測定を実施した。]
[0042] １〜２．溶液１〜１２：
貯蔵液：４ｍｌの水中に溶解した０．２ｇのＰＶＡ及び０．６ｇのＰＥＧ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）。以下の溶液を該貯蔵液から製造した：
１．溶液１：８００μｌの貯蔵液、ｐＨ５。
２．溶液２：ＮａＯＨで９に調整したｐＨ値を有する８００μｌの貯蔵液。
３〜４．溶液３〜４：
貯蔵液：４ｍｌの水中に溶解した０．１５ｇのＰＶＡ及び０．６５ｇのＰＥＧ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）。
３．溶液３：８００μｌの貯蔵液、ｐＨ５。
４．溶液４：ＮａＯＨで９に調整したｐＨ値を有する８００μｌの貯蔵液。
５〜６．溶液５〜６：
貯蔵液：４ｍｌの水中に溶解した０．１ｇのＰＶＡ及び０．７ｇのＰＥＧ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）。
５．溶液５：μ８００μｌの貯蔵液、ｐＨ５。
６．溶液６：ＮａＯＨで９に調整したｐＨ値を有する８００μｌの貯蔵液。
７〜８．溶液７〜８：
貯蔵液：４ｍｌの水中に溶解した０．０５ｇのＰＶＡ及び０．７５ｇのＰＥＧ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）。
７．溶液７：８００μ８００μｌの貯蔵液、ｐＨ５。
８．溶液８：ＮａＯＨで９に調整したｐＨ値を有する８００μｌの貯蔵液。
９〜１０．溶液９〜１０：
貯蔵液：４ｍｌの水中に溶解した０．８ｇのＰＥＧ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）（ＰＶＡを含まない溶液）。
９．溶液９：μ８００μｌの貯蔵液、ｐＨ５。
１０．溶液１０：ＮａＯＨで９に調整したｐＨ値を有する８００μｌの貯蔵液。]
[0043] 図４は得られた結果を示す。３６日後にＧＳＮＯの分解がアルカリポリマー溶液中で有意にいっそう低いことが明らかである。] 図４
[0044] 図３及び４の比較は、安定化作用を有するポリマーを使用することにより、アルカリ条件で見られるＧＳＮＯの安定性強化をさらに増大できることも示す。該ポリマーを含有する酸性溶液により３６日目でも約３０の相対吸光度値が観察されるため、該ポリマー自体がＧＳＮＯの安定性を強化する。驚いたことに、該ポリマーの安定化作用は、該ポリマーをアルカリ条件下で使用すると有意に強化することができ、溶液６及び８では相対吸光度値は６０より高く、すなわち、作用の約８０％の増大が見られる。] 図３

权利要求:

請求項1
通常の添加剤と共に、場合により１種又は複数の薬学的に許容できるポリマー（単数又は複数）と共に、ＧＳＮＯを有効成分として含む医薬組成物であって、ｐＨ値が７より高く、好ましくは約７．５〜１０、より好ましくは約８〜９であることを特徴とする上記医薬組成物。
請求項2
以下の群：多糖類、ＰＶＡ、ＰＶＰ、ＰＥＧ、アルギン酸並びにその塩及びエステルから選択される、他の１種又は複数の薬学的に許容できるポリマーを含有することを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
請求項3
水性ゲルであり、場合により多糖類と共に、好ましくはキトサンと共に、薬学的に許容できるポリマーとしてＰＶＡ及びＰＥＧポリマーを含有することを特徴とする、請求項２に記載の医薬組成物。
請求項4
請求項１から３までのいずれか一項に記載の組成物を乾燥、好ましくは凍結乾燥させることにより調製されることを特徴とする固形形態の医薬組成物。
請求項5
ＧＳＮＯを含有する溶液又は非固形組成物を安定化させる方法であって、前記溶液又は組成物のｐＨが７より高い、好ましくは約７．５〜１０、より好ましくは約８〜９の値に調整されることを特徴とする上記方法。
請求項6
前記溶液が水性であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
請求項7
前記組成物が、１種又は複数の薬学的に許容できるポリマー及び添加剤を含有する非固形医薬組成物であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
請求項8
前記組成物が、多糖類、ＰＶＡ、ＰＶＰ、ＰＥＧ、アルギン酸並びにその塩及びエステルから選択される、他の１種又は複数の薬学的に許容できるポリマーを含有することを特徴とする、請求項７に記載の方法。
請求項9
前記組成物が水性ゲルであり、場合により多糖類と共に、好ましくはキトサンと共に、薬学的に許容できるポリマーとしてＰＶＡ及びＰＥＧポリマーを含有することを特徴とする、請求項８に記載の方法。